광풍무 다운로드
비아오 마 또는 유산 주 또는 콴 첸에 대한 서신. 모든 마우스 실험은 난카이 대학의 생명 과학 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었습니다. MDA-MB-231 유방암 세포(100 μl PBS에서 2×106)를 6내지 8주령 암컷 BALB/c 누드 마우스의 겨드랑이에 피하 주사하였다. 종양 크기는 이식 후 1주일마다 3-5일마다 측정하였고 종양 부피는 공식 V=0.5 × L × W2(V: 부피, L: 길이, W: 폭)를 사용하여 분석하였다. 마우스를 희생하고 피하 종양을 외과적으로 제거하고, 무게를 달고, 촬영했습니다. 각 그룹에 대한 샘플 크기를 미리 결정하는 데 통계적 방법이 사용되지 않았습니다. 실험은 무작위화되지 않았다. Sun, L. et al. 혼합 리니지 키나아제 도메인 유사 단백질 중재체 괴사 시그널링 RIP3 키나제의 다운스트림. 셀 148, 213-227 (2012). Nakayama, K.
외. Siah2는 prolyl-hydroxylases의 안정성을 통제하고, HIF1alpha 풍부를 통제하고, 저산소증에 생리적인 반응을 조절합니다. 셀 117, 941-952 (2004). SIAH2- 및 NRF1 녹다운 세포를 생성하기 위해, 올리고뉴클레오티드는 에이지와 에코리 사이트 사이에 pLKO.1로 복제하였다. 렌티바이러스 패키징 플라스미드 psPAX2 및 pMD2.G는 렌티바이러스 생산을 위한 HEK293T 세포내로 백본 플라스미드를 병용하하였다. 세포는 배양 배지에서 2.5 μg ml-1 순으로 정하였다. 사용되는 올리고뉴클레오티드 쌍은 다음과 같습니다: SIAH2 (5′-CCGGGCTGG CTAATAGACCTCTCTCTTTTTTTTTTTTTG-3′ 및 5′-AATTCAAAAAAAAAAAAAAGAGAGAAAAAAGACATATCTGATTCTCTTTTTTTTG-3); NRF1 (5′-CCGGGCCACAGCCACACACATAGTTATATATATATATGTGTGTGTGTGTGTGTGTTTTTTTG-3′ 및 5′-AATTCAAAAGC카카카카카타타타그타그GTGTGGGGGGGG-3′). RPM 샘플로부터의 게놈 DNA는 CTAB 방법에 의해 추출되었다[12]. DNA의 질 및 양은 나노드롭 분광광도계(Nano Drop 2000, 미국)와 아가로즈 겔로 확인되었다. 추출된 DNA는 추가 처리될 때까지 -20°C에서 보관하였다.
세균 다양성 분석을 위해, 16S rDNA의 V3-V4 지역은 세균 커뮤니티 라이브러리를 구성하기 위해 증폭되었다, 다음과 같은 원핵 프라이머를 사용하여: 343F (5`-TACGGRAGGCAGCAG-3`), 및 798R (5`-AGGGTATATTTT-3`) [13]. Magda, D. 외. mtDNA 고갈은 배양 및 이종이식에서 성장한 인간 세포에서 특정 유전자 발현 프로파일을 부여합니다. BMC 제놈. 9, 521 (2008). Weinberg, F. 외. 미토 콘 드리 아 물질 대사와 ROS 생성 은 크라스 중재 종양 genigenicity에 대 한 필수적 이다. Proc. Natl Acad.
Sci. 미국 107, 8788-8793 (2010). 카르모나-폰테인, C. 외. 종양 미세 환경에서 공간 조직의 대사 기원. Proc. Natl Acad. Sci.
미국 114, 2934-2939 (2017). 유방암 조직 마이크로어레이는 US Biomax로부터 구입되었습니다. 이 조직 microarrays는 침략적인 유방 암의 158의 분석 가능한 케이스 및 일반적인 유방 조직의 27의 분석 가능한 케이스로 이루어져 있습니다. 항원 회수의 경우, 슬라이드를 재수화한 다음 10 mM 구연산나트륨 완충제(pH 6.0)로 3분 동안 가열하여 압력을 받다. 샘플을 내인성 과산화아역활동을 차단하기 위해 15분 동안 3% H2O2로 처리한 다음 실온에서 1시간 동안 5% 염소 혈청으로 차단하였다. 이어서 조직을 4°C에서 하룻밤 사이에 표시된 항체로 배양하고, 실온에서 1시간 동안 HRP-이차 항체로 인큐베이션하였다. 면역 반응성 신호를 DAB 기질 키트(MaiXin Bio)로 시각화하였다. 모든 샘플에서 단백질 발현 수준은 면역 양성 세포 및 면역 염색 강도의 백분율에 따라 4 등급 (음수, +, ++, +++)의 척도로 채점되었다.